發(fā)布時(shí)間： 2021-03-12 點(diǎn)擊次數： 1390次
迷你離心機提供多種功能和*更換轉子的設計,性能可靠，操作簡(jiǎn)單方便，僅需放好微量管，蓋上蓋子即啟動(dòng)，轉速可以很快達到zui高轉速，其離心力均勻快速的施加到微量管的管帽和管壁上，特別適用于處理PCR管和微量過(guò)濾，快速從試管壁或試管蓋上甩下試劑，以及試管或排管的慢速離心。
想要通關(guān)蛋白表達少不了離心機。常言道細節決定成敗，尤其像蛋白表達提純這樣復雜的實(shí)驗。一個(gè)操作上的小失誤，可能直接影響結果。
雖然可以大致分為三步，表達、分離、純化，但是這個(gè)過(guò)程十分繁瑣。
蛋白表達前期還有一系列復雜過(guò)程，耗費時(shí)間也長(cháng)，到后面一步，還不能放松警惕。
蛋白進(jìn)行純化是通關(guān)的一步，選擇合適的純化方法，可以提高蛋白的純化效率，讓蛋白純化簡(jiǎn)單便捷。常用的方法有:親和層析、離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析、疏水層析等。
親和層析
親和層析純化是利用生物大分子物質(zhì)具有與某些相應的分子專(zhuān)一性可逆結合的特性進(jìn)行蛋白純化的技術(shù)。
離子交換層析
離子交換層析是一種依據蛋白表面所帶電荷量不同進(jìn)行蛋白分離純化的技術(shù)。
凝膠過(guò)濾層析
凝膠過(guò)濾(也叫排阻層析或分子篩)是一種根據分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。
疏水作用層析
疏水作用層析是利用鹽-水體系中樣品分子的疏水基團和層析介質(zhì)的疏水配基之間疏水力的不同而進(jìn)行分離的一種層析方法。
雖然方法多種多樣，但是，都需要用離心機來(lái)進(jìn)行分離純化。
用脂肪氧合酶重組蛋白的誘導為例：
1.接種含有重組脂肪氧合酶蛋白的大腸桿菌BL21菌株于5 mL LB液體培養基中（含100 ug/mL 氨芐青霉素），37℃震蕩培養過(guò)夜。
2.按1∶50或1：100的比例稀釋過(guò)夜菌，一般轉接1 mL過(guò)夜培養物于100 mL（含100 ug/mL 氨芐青霉素）LB液體培養基中，37℃震蕩培養至OD600 = 0.6 - 0.8（*0.6，大約需3 h）。取10 ul 樣品用于SDS-PAGE 分析。
3.對照組不加誘導劑，實(shí)驗組加入IPTG至終濃度0.5 mmol/l，37℃繼續培養1-3h。
4.離心機12000 rpm 離心10 min，棄上清，菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。
以上就是關(guān)于蛋白表達的通關(guān)講解，本文重點(diǎn)就是要表達，一個(gè)實(shí)驗的成敗，細節很關(guān)鍵，雖然人工方面是可以人為把控的，但是輔助設備的細節，還是要多加注意，選一臺合適的離心機很關(guān)鍵。
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